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组织样本处理

sample processing

组织样本处理服务包含：石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片/涂片

技术原理

石蜡切片（paraffin section）是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中亚博体彩网站-√?；畹南赴蜃橹辔奚该?，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出亚博体彩网站-√；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，失去原有正常结构亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，因此亚博体彩网站-√，组织要经固定亚博体彩网站-√、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，而能清晰辨认其形态结构亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片亚博体彩网站-√。它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的亚博体彩网站-√。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程，大大缩短了制片时间亚博体彩网站-√。同时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，由于此法不需要经过脱水亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、透明和浸蜡等步骤亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，因而较适合于脂肪亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、神经组织和一些组织化学的制片亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，并作为快速切片的方法应用在临床诊断

特点

石蜡切片标本可以长期保存使用亚博体彩网站-√，为永久性显微玻片标本。

冰冻切片制作过程较石蜡切片快捷亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、简便亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，而多应用于手术中的快速病理诊断．组织变化不大,能很好保存脂肪亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，类脂等成分亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类亚博体彩网站-√，特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。

石蜡切片（paraffin section）

组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，也是病理学和法医学等学科用以研究亚博体彩网站-√、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法亚博体彩网站-√，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。教学中亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√?亚博体彩网站-√；畹南赴蜃橹辔奚该?，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，因此亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，组织要经固定亚博体彩网站-√、石蜡包埋亚博体彩网站-√、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构亚博体彩网站-√。

（一）石蜡切片前的准备

1. 切片刀。传统的切片刀在使用之前亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，一定要在显微镜下检查刀口的损伤程度亚博体彩网站-√，然后进行磨刀。现在也可以使用一次性刀片，可省去磨刀。

2. 修整蜡块：切去组织周围过多的石蜡，一般情况下在组织周围留有约1~2mm的石蜡边，两边必须平行亚博体彩网站-√。

3. 蜡块固定：修整好的蜡块先固定在事先准备好的小方木块或者金属块上亚博体彩网站-√，固定方法是把蜡铲先在酒精灯上加热亚博体彩网站-√，再将蜡块底部烙熔亚博体彩网站-√，迅速烙粘在小方木块或金属块底座上亚博体彩网站-√。

4. 载玻片擦洗干净后亚博体彩网站-√，在其表面涂上粘附剂（蛋白甘油亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、APES或多聚赖氨酸）亚博体彩网站-√，根据染色方法选择不同的粘附剂亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

5. 准备好毛笔亚博体彩网站-√、镊子亚博体彩网站-√、染色架。

6. 调好展片器内水的温度（45℃）亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，有时也可以加些酒精到水中。

（二）石蜡切片

1. 将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，固定蜡块底座或蜡块，调整蜡块与刀至合适位置亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，刀刃与蜡块表面呈5度角。

2. 切片多使用轮转式切片机亚博体彩网站-√，切片时亚博体彩网站-√，左手执毛笔亚博体彩网站-√，右手转切片机转轮，先修出组织块亚博体彩网站-√。

3. 调整切片机上的切片厚度为4~7μm亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，然后切片亚博体彩网站-√。

4. 切片可以是单张亚博体彩网站-√，也可以是连续切片形成蜡带

5. 展片和捞片：

   （1）直接展片法：在载玻片上滴加几滴蒸馏水亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，然后把切片铺在小滴上面亚博体彩网站-√，用酒精灯在载玻片下面加热，待完全展平亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，倾斜载玻片，倒弃多余水分亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，同时摆正切片亚博体彩网站-√。

   （2）温水漂浮法：此法用展片机或者用恒温水浴箱，先使水温保持在45~50℃，用左手拿毛笔轻轻托起切片亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，用右手用眼科镊子夹起切片的一角亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，正面向上轻轻平铺放置于展片器的水面上亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，动作要轻快亚博体彩网站-√，切好的石蜡切片漂浮在温水中受热后及在表面张力的作用会自然平整地展开亚博体彩网站-√，必要时可用眼科镊轻轻拔开亚博体彩网站-√，然后捞片亚博体彩网站-√，并及时编号亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

6. 展好的切片在室温下稍微干燥后亚博体彩网站-√，放在40℃恒温烤箱中，小片组织30分钟即可亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，大的需12~24小时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，烤干备用。

（三）注意事项

1. 切片刀刃倾斜过大或过小都不能正常进行切片。

2. 修整蜡块时要细心亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，看清楚组织在蜡块中的位置亚博体彩网站-√，以免将需要的组织修掉亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

3. 连续转动切片机的转轮时，速度一定要均匀，不能时快时慢，以免切片厚薄不一亚博体彩网站-√。

4. 使用轮转式切片机切片时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，是由下向上切，为得到定然整的切片亚博体彩网站-√，防止组织出现刀纹裂缝亚博体彩网站-√，应将组织硬亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、脆难切的部分放在上端亚博体彩网站-√，如皮肤应将表皮部分向上亚博体彩网站-√，肠胃等组织应将浆膜面面朝上亚博体彩网站-√。

5. 用展片器展片时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，水温应根据使用的石蜡熔点进行了调整亚博体彩网站-√，一般低于石蜡熔点10~15℃亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；捞片的时候动作要轻亚博体彩网站-√、稍快亚博体彩网站-√。动作太大容易出现气泡亚博体彩网站-√。如果没有展片器可以用温水浴锅来代替亚博体彩网站-√。

6. 单个切片要摆到载玻片的1/3与2/3交界处亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；连续切片的粘片顺序一般是从左到右亚博体彩网站-√，组织切片较小是，可以并列粘贴2~3条蜡带亚博体彩网站-√。

7. 烤片的温度不宜过高亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；烤片的时间要合适亚博体彩网站-√。脑组织要待稍微晾干一些后，才能烤片亚博体彩网站-√，否则容易产生气泡影响染色和观察亚博体彩网站-√。

冰冻切片（frozen section）

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片亚博体彩网站-√。它实际上是以水为包埋剂亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，大大缩短了制片时间亚博体彩网站-√。同时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，由于此法不需要经过脱水亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、透明和浸蜡等步骤，因而较适合于脂肪亚博体彩网站-√、神经组织和一些组织化学的制片亚博体彩网站-√，并作为快速切片的方法应用在临床诊断亚博体彩网站-√。

1. 取材：  应尽可能快地采取新鲜的材料亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，防止组织发生死后变化亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

2. 速冻：  为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需   要，一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，使组织温度骤降，缩短降温的时间，减少冰晶的形成。  液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）亚博体彩网站-√，如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片亚博体彩网站-√。若需要保存亚博体彩网站-√，应快速以铝箔或塑料薄膜封包亚博体彩网站-√，立即置入-80℃冰箱贮存备用。

3. 固定：  样品托上涂一层OCT包埋胶亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，将速冻组织置于其上亚博体彩网站-√，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。  取下组织置于锡箔或者玻片上亚博体彩网站-√，样品托速冻。  组织置于样品托上亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

切片：  恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机亚博体彩网站-√，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内亚博体彩网站-√，故切片时不受外界温度和环境影响亚博体彩网站-√，可连续切薄片至5-10μm亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。切片时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，低温室内温度以-15℃～-20℃为宜亚博体彩网站-√，温度过低组织易破碎亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，抗卷板的位置及角度要适当亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。切好室温放置30min后亚博体彩网站-√，入4℃丙酮固定5~10min亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，烘箱干燥20min。PBS洗5min×3亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。进行抗原热修复亚博体彩网站-√，微波热修复也可亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，室温自然冷却⊙遣┨宀释?√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√？捎?%H2O2孵育5~10min亚博体彩网站-√，消除内源性过氧化物酶的活性亚博体彩网站-√。

细胞爬片

就是让玻片浸在细胞培养基内亚博体彩网站-√，细胞在玻片上生长，主要用于组织学亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，免疫组织化学，冰冻切片亚博体彩网站-√，细胞涂片，原位杂交等.

细胞爬片特点

1.玻片表面经过TC处理亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，双面均可使用

2.γ射线灭菌,保证无菌.

3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养.

4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板

5.超强吸附：该玻片表面具有永久的阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此亚博体彩网站-√，无需粘黏剂或者蛋白包被亚博体彩网站-√，该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。

操作注意

使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少)

比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中.