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荧光原位杂交(FISH)

Fluorescence in situ



FISH技术:荧光标记的原位杂交技术


1974年Evans首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,提高了定位的准确性亚博体彩网站-√。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,即FISH技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上亚博体彩网站-√,标志着染色体定位技术取得了重要进展亚博体彩网站-√。20世纪90年代,随着人类基因组计划的进行,由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要,FISH技术得到了迅速的发展和广泛应用亚博体彩网站-√。

原理将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素亚博体彩网站-√、地高辛亚博体彩网站-√,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析亚博体彩网站-√。


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实验流程


FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。


特点:原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记亚博体彩网站-√。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,可以通过延长曝光时间加强信号强度亚博体彩网站-√,故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长亚博体彩网站-√、放射线的散射使得空间分辨率不高亚博体彩网站-√、及同位素操作较繁琐等亚博体彩网站-√。采用荧光标记系统则可克服这些不足亚博体彩网站-√,这就是FISH技术亚博体彩网站-√。FISH技术作为非放射性检测体系亚博体彩网站-√,具有以下优点:1亚博体彩网站-√、荧光试剂和探针经济亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、安全;2亚博体彩网站-√、探针稳定亚博体彩网站-√,一次标记后可在两年内使用亚博体彩网站-√;3亚博体彩网站-√、实验周期短亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、能迅速得到结果亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、特异性好亚博体彩网站-√、定位准确亚博体彩网站-√;4亚博体彩网站-√、FISH可定位长度在1kb的DNA序列亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,其灵敏度与放射性探针相当亚博体彩网站-√;5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;6亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。


实验结果展示


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