锐赛生物

靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示肿瘤个性化治疗项目QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往期精品SCI漂亮SCI案例库科研转化成果u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台公司新闻价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉业务招商诚觅英才内部推荐加入我们留言板联系我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料促销活动

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原位杂交(ISH)

In situ hybridization



实验原理


将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交亚博体彩网站-√。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术亚博体彩网站-√。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交)亚博体彩网站-√,所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA亚博体彩网站-√、rRNA和tRNA分子亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。RNA原位杂交技术 经不断改进亚博体彩网站-√,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性亚博体彩网站-√、定位和定量分析亚博体彩网站-√,已 成为最有效的分子病理学技术亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向亚博体彩网站-√。


原位杂交实验步骤:前期胚胎的制备亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。


原位杂交第一天进行重新水化和固定亚博体彩网站-√、预杂交亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、杂交亚博体彩网站-√。

原位杂交第二天进行 1 将探针回收亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃亚博体彩网站-√,放置30分钟,重复一次亚博体彩网站-√。3置换2XSSCT1ml,60℃亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,放置15分钟亚博体彩网站-√。4置换0.2XSSCT1ml亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,60℃,放置30分钟,重复一次亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。5用MABT洗两次亚博体彩网站-√,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。6室温下加1ml 1:2:7溶液亚博体彩网站-√,时间为一小时。  7  按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连地高辛抗体亚博体彩网站-√,4C 冰箱过夜。

原位杂交第三天进行1) 用1ml含10%热灭活血清的MABT溶液置换抗体溶液亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,放置摇床上25分钟亚博体彩网站-√,然后用1mlMABT置换亚博体彩网站-√,25分钟亚博体彩网站-√,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,最后用1mlMABT溶液置换亚博体彩网站-√,25分钟。2) 用1ml 1mM**米睉的Staining buffer洗三次亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,每次放置五分钟。3)将胚胎转入十六孔板中亚博体彩网站-√,吸去staining buffer亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,拍照。6)4C冰箱保存亚博体彩网站-√。


原位杂交服务内容


  1. 细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱亚博体彩网站-√,基因表达和基因组进化的研究;

  2. 感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,如EB病毒mRNA亚博体彩网站-√、人类**状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√;

  3. 癌基因亚博体彩网站-√、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;

  4. 基因在染色体上的定位;

  5. 检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√;

  6. 分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定亚博体彩网站-√,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。


实验结果展示


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