锐赛生物

靶标发现与功能验证基因操作和基因组编辑药物靶标开发生化/细胞水平验证高通量高内涵分析GPCR/核受体检测激酶检测体外药理学体外安全性评价药代动力学毒理学评价药代动力学/毒理学抗肿瘤药理评价代谢类和心脑血管疾病药理评价中枢神经系统药理评价炎症/自身免疫疾病药理评价体内药理学立项成果展示肿瘤个性化治疗项目QPCRWB检测ELISA检测甲基化检测SNP检测高效液相色谱法(HPLC)蛋白质谱基因芯片核酸、蛋白分析服务目的基因的ORF克隆化学合成质粒载体构建siRNA的细胞转染及筛选技术服务shRNA载体构建及筛选技术服务RNAi病毒包装及筛选技术服务miRNA的表达载体构建及病毒包装载体构建及筛选服务chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀实验服务慢病毒包装腺病毒包装细胞培养原代细胞分离干细胞诱导分化CCK-8检测流式周期检测流式凋亡检测流式分选细胞流式鉴定细胞表面抗体活性氧(ROS)检测线粒体膜电位检测transwell检测管腔形成实验细胞黏附实验细胞克隆形成实验细胞免疫荧光检测稳转株构建双荧光素酶检测细胞干性成球能力磁珠分选细胞MDA(丙二醛)检测酶活动力学检测HDA检测细胞实验服务常规化学染色免疫组化(IHC)免疫荧光(IF)原位杂交(ISH)荧光原位杂交(FISH)原位末端标记染色(TUNEL)组织样本处理拍照处理病理学检测服务裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源肿瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管类疾病模型肾脏疾病模型肝脏疾病模型炎症与自身免疫疾病模型呼吸系统疾病模型其他疾病模型动物实验服务2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往期精品SCI漂亮SCI案例库科研转化成果u.cad癌症筛查检测全外显子组基因检测其他疾病基因检测生物信息数据分析服务肿瘤学领域研究平台病理学中心实验室心血管与代谢领域疾病研究平台炎症与自身免疫疾病领域研究平台特发肺纤维化疾病领域研究平台抗体药物一体化临床前研发平台药性评价平台公司新闻价值金字塔三元悖论为客户赢得荣誉业务招商诚觅英才内部推荐加入我们留言板联系我们推荐朋友SCI论文发表奖励制度科研资助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 发光液细胞周期与凋亡检测自研试剂基因质粒病毒免费送细胞库动物饲料促销活动

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021-80158420

免疫荧光(IF)

immunofluorescence



服务介绍


免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物亚博体彩网站-√,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)亚博体彩网站-√。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,从而确定抗原或抗体的性质亚博体彩网站-√、定位亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,以及利用定量技术测定含量亚博体彩网站-√。


实验原理


将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应亚博体彩网站-√。

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实验流程


免疫荧光单标记方法

免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子,方法比较简单亚博体彩网站-√,只要按照染色步骤去做亚博体彩网站-√,通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择,固定液选择的合适与否亚博体彩网站-√,可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下亚博体彩网站-√。

1、所需材料与试剂

a, 培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。

b, 一抗亚博体彩网站-√、FITC或TRITC标记的二抗亚博体彩网站-√。

c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃预冷20 min)亚博体彩网站-√。

d, 封闭液。

e, 0.01mol/LPBS缓冲液亚博体彩网站-√。

2、染色方法

a, 取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿亚博体彩网站-√,用0.01MPBS洗2-3遍亚博体彩网站-√。

b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain

c, 加入4%多聚甲醛试问固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。

d亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,正常阻断血清1:20封闭试问20-30 min亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,抑制IgG的非特异性结合。阻断血清必须选择与二抗同一种属的正常血清亚博体彩网站-√。

e, 去掉正常血清亚博体彩网站-√,直接加入一抗亚博体彩网站-√,37℃孵育1 h或4℃过夜亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√⊙遣┨宀释?√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√?固逡?.01 mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。

f, 0.3% TritonX-100洗5 min亚博体彩网站-√,0.01 mol/IPBS洗5 min亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,0.3% TritonX 5 min,0.01 M PBS洗5 rain亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,37℃亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,孵育1h亚博体彩网站-√。

h, 0.3%TritonX-100洗5rain亚博体彩网站-√,0.01 mol/LPBS洗5min亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,0.3% Triton X 5min,0.01mol/LPBS洗5 min,用滤纸吸干。

i, 90%甘油(PBS配制)封片。

j, 激光扫描共焦显微镜下观察亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,或于4℃避光保存。

免疫荧光双标记方法

免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。此方法稍微复杂一些亚博体彩网站-√,首先应注意所用的一抗必须是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如:A抗体为多克隆抗体亚博体彩网站-√,来自家兔亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√;B抗体为单克隆抗体,来自小鼠)亚博体彩网站-√。其次亚博体彩网站-√,两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,且尽量远离,通??梢匝≡馞ITC和TRITC亚博体彩网站-√、Alex488和TRITC亚博体彩网站-√、FITC和Cy5亚博体彩网站-√,或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下,染色时两种一抗可以同时孵育亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱,而另一种颜色比较强时亚博体彩网站-√,应考虑先孵育颜色较弱的二抗亚博体彩网站-√。其他步骤同免疫荧光单标记。


客户提供

细胞株或细胞爬片。注:细胞爬片不宜太密亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√;细胞必须固定亚博体彩网站-√。组织切片亚博体彩网站-√,一抗


我们提供

基本实验步骤亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、药品、样品处理亚博体彩网站-√、图片及图片分析亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√,荧光显微镜或共聚焦显微镜拍摄


实验周期:1-3周


实验结果展示


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