锐赛生物

线粒体膜电位检测

Membrane Potential Detection

服务介绍

大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一亚博体彩网站-√。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩亚博体彩网站-√、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃亚博体彩网站-√，则细胞凋亡不可逆转亚博体彩网站-√。

实验原理

JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料亚博体彩网站-√，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在亚博体彩网站-√，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1 浓度低或膜电位水平低时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，主要以单体形式存在亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，激发波长为527nm亚博体彩网站-√，呈绿色荧光亚博体彩网站-√；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时亚博体彩网站-√，形成聚合物亚博体彩网站-√，发出红色的荧光，激发波长为590nm亚博体彩网站-√。当细胞发生凋亡时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放亚博体彩网站-√，红光强度减弱亚博体彩网站-√，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光亚博体彩网站-√，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

实验流程

1. 细胞培养亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；

2. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组，收集细胞；

3. 用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10⁶的细胞亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，混匀并预热至37℃亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；

6. 取500 μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min亚博体彩网站-√。

7. 室温离心（2000rpm,5min）收集细胞亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，用1×Incubation Buffer洗两次亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞亚博体彩网站-√；

9. 流式细胞仪检测亚博体彩网站-√，分析。

客户提供

细胞株(冻存株或培养好的细胞)亚博体彩网站-√，相关药品或MMP检测试剂盒（可代购）

我们提供

实验步骤、结果图亚博体彩网站-√、数据结果和分析报告

实验周期：1-2周亚博体彩网站-√，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定亚博体彩网站-√。

实验结果展示

线粒体细胞膜电位检测结果图