锐赛生物

RNAi病毒包装及筛选

package virus

实验原理

与化学合成的siRNA和shRNA质粒载体相比，利用慢病毒或腺病毒表达shRNA，一方面可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、悬浮细胞亚博体彩网站-√，提高shRNA导入细胞的效率亚博体彩网站-√，另一方面病毒介导可延长RNAi的时间亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，尤其慢病毒感染后可以整合到宿主细胞基因组亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，进行稳转筛选。

图2.4慢病毒介导RNAi原理示意图

技术应用

技术应用基因功能的体内外研究

病理机制研究

实验流程

实验结果展示

图 1 相对定量 PCR 检测 3 组 shRNA 慢病毒感染组相对阴性对照组目的基因的干扰效果

TPOUBLESHOOTING

常见问题 FAQ

Q：化学合成siRNA亚博体彩网站-√，shRNA质粒和shRNA病毒进行细胞实验的优缺点？

Q：我提供靶细胞为什么需进行预实验亚博体彩网站-√？需检测哪些内容亚博体彩网站-√？

A：客户提供的靶细胞进行培养后确定其状态亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，我们会进行靶基因的表达丰度检测亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，确认靶基因的表达量亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，然后采用慢病毒或腺病毒进行细胞的 MOI 值摸索，确认靶细胞用何种病毒预计采用多大的病毒量进行感染实验亚博体彩网站-√。若预实验结果表明细胞中靶基因的本底表达本身很低则不建议进行干扰筛选工作亚博体彩网站-√。

Q ：病毒介导的RNAi筛选工作公司作何保证亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√？

A：首先预实验摸索客户提供靶细胞的 MOI 值亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，感染效率达到 80% 以上亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，从而确定病毒的包装类型亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。然后设计三个干扰靶点并进行病毒包装工作，感染靶细胞后亚博体彩网站-√，我们通过 qPCR 检测，确保至少一个靶点的干扰效果大于80%亚博体彩网站-√。实验结束后最佳干扰靶点的腺病毒可根据客户的要求进行扩增亚博体彩网站-√；最佳干扰靶点的慢病毒可以根据客户的要求大量包装后提供给客户亚博体彩网站-√。

参考文献

1. Buchschacher GL Jr, Wong-staal F. Development of Lentiviral Vectors for Gene Therapy for Human Diseases.Blood2000,95(8):2499-2504.