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产品简介

• CCK-8试剂盒亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒亚博体彩网站-√。

• WST-8是一种类似于MTT的化合物亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，在电子耦合试剂1-MethoxyPMS存在的情况下亚博体彩网站-√，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan) (图1)亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。细胞增殖越多越快亚博体彩网站-√，则颜色越深;细胞毒性越大亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，则颜色越浅亚博体彩网站-√。对于同样的细胞亚博体彩网站-√，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图 1. WST-8 分子结构式及其检测原理

产品优势:

本试剂盒提供了一种灵敏度高亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、操作简便、使用安全的细胞增殖与毒性检测方法亚博体彩网站-√。与传统的 MTT 实验相比具有明显的优势:

• CCK-8 法是用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测亚博体彩网站-√，也可以用于抗癌药物等对细胞有

• 毒试剂诱导的细胞毒性检测亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等与细胞活性和增殖相关的实验的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法

• CCK-8 法对细胞无毒性，可以多次测定选取最佳测定时间 亚博体彩网站-√，与 MTT 方法相比线性范围更宽亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，灵敏度更高

• CCK-8 溶液不需配制亚博体彩网站-√，可以直接加入到细胞样品中亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，即开即用，比 MTT 更加稳定

• 实验结果重复性好亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，适合大规模，高通量的样品检测

• MTT 实验生成的 formazan 不是水溶性的亚博体彩网站-√，需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解而本方法产生的 formazan 是水溶性的亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差

产品包装:

贮藏条件:

CCK-8 溶液在避光、0-5°C的条件下可以保存 1 年亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，若长期不用可在-20°C下避光保存 2 年亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。建议分装后保存于-20°C亚博体彩网站-√，使用时提前于 4°C解冻，请避免反复冻融，否则增加背景值亚博体彩网站-√，干扰实验结果亚博体彩网站-√。

所需的设备及耗材:

• 10ul、100-200 ul 以及多通道移液器

• 酶标仪(带有 450 nm 滤光片)

• 96 孔培养板

• CO2 培养箱

使用方法:

1. 在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)亚博体彩网站-√，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

2. 按照实验需要亚博体彩网站-√，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激亚博体彩网站-√，处理一段适当的时间 (例如:6,12, 24或48小时)亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

3. 每孔加入10ul CCK-8溶液亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。如果起始的培养体积为200ul亚博体彩网站-√，则需加入20ul CCK-8溶液亚博体彩网站-√，以此类推亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√?亚博体彩网站-√？梢杂眉酉嘤α肯赴嘌?/span>CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检测亚博体彩网站-√，需设置加相应量细胞培养液亚博体彩网站-√、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。预实验时可以在0.5亚博体彩网站-√、1亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√、2和4小时后分别用酶标仪检测亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，可以使用大于600nm的波长亚博体彩网站-√，例如650nm亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，作为参考波长进行双波长测定。

6. 如果需要暂时不测定O.D值亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室温亚博体彩网站-√，24小时内吸光度不会发生变化亚博体彩网站-√。

注意事项:

1. 使用 96 孔板进行检测时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题亚博体彩网站-√?亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√？山?96 孔板外围一圈加培养基亚博体彩网站-√、水或 PBS 保湿亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。同时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，可以把 96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。

2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同亚博体彩网站-√。在正式实验前亚博体彩网站-√，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入 CCK-8 试剂后的培养时间。

3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，建议铺板过程中注意时?亚博体彩网站-√；煸?，防止因细胞沉淀造成不均匀亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√。加入 CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基 和CCK-8 溶液充分混匀亚博体彩网站-√。

4. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响亚博体彩网站-√。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5. 加入 CCK-8 时亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，如果细胞培养时间较长亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，培养基颜色或 pH 值已变化，建议换用新鲜的培养基亚博体彩网站-√。

6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡亚博体彩网站-√，否则会干扰测定亚博体彩网站-√。

7. 本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中亚博体彩网站-√，请在生物安全柜内无菌操作亚博体彩网站-√亚博体彩网站-√，避免污染。

8. 为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作亚博体彩网站-√。

参考文献:

1. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferationand cytotoxicity assays. Mosmann T (1983).Journal of Immunological Methods. 65:55–63.

2. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator forNADH as well as cell viability,Talanta,44, 1299-1305, 1997.

3. A Vital Role for Ape1/Ref1 Protein in Repairing Spontaneous DNA Damage in HumanCells, Molecular Cell, 17, 463-470, 2005.

4. 4. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway inTHP-1 cell line. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Life Science Journal.Vol.5,No.2, 2008.